长海医院实验诊断科开展特色诊断项目系列介

　

快速真菌检测--(1-3)-β-D-葡聚糖实验

1、理论基础★

深部真菌感染，是指侵犯机体皮下组织、内脏器官及中枢神经系统的真菌性疾病。目前，深部真菌感染已成为免疫功能低下患者发病和死亡的主要原因。而深部真菌感染治疗成败的关键在于早期诊断，正确用药。

图1影响侵袭性真菌感染率的主要因素

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传统真菌鉴定方法因周期长、血培养率低而难于快速诊断，因此研究者逐渐将早期诊断的注意力转向建立血清学方法来检测真菌菌体成分或代谢产物。

(1-3)-β-D-葡聚糖是一种广泛存在于真菌细胞壁的抗原成分，占其干燥重量的80%—90%，其他微生物、动物及人的细胞成分和细胞外液均不含有。当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞吞噬、消化代谢后，(1-3)-β-D-葡聚糖可从细胞壁中释放出来，从而使血液或其他体液中(1-3)-β-D-葡聚糖含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫系统可迅速将其清除。而浅部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被释放出来，因此其在血液及体液中的存在可以很大程度上视为IFI(深部真菌感染)的标志。可用于检测念珠菌、毛孢子菌、曲霉菌、镰刀菌、卡氏肺泡孢子菌，不可检测隐球菌、接合菌（根霉/毛霉等）。

图2.(1-3)-β-D-葡聚糖是多数真菌细胞壁的共有结构

2、检验方法

在实验条件下，来源于真菌细胞壁的(1-3)-β-D-葡聚糖可以特异性地激活反应剂的酶促凝集系统，使反应液的透光度发生变化。利用(1-3)-β-D-葡聚糖标准品建立β-D-葡聚糖生物效价与透光度关系的标准曲线，便可定量地测定人血液的(1-3)-β-D-葡聚糖含量。

图3.比浊法反应机理图示

图4.(1-3)-β-D-葡聚糖检测分析仪

3、样本要求①样本的制备：使用专用红色无热原真空采血管，采集受试者空腹静脉血2-3ml并立即混匀。半小时内送检。将采血管以g离心10分钟，取出后至2-8℃冰箱备用；若在4小时内不使用，可分离出血浆/血清置-20℃以下保存30天。

注意：在采血以及制备血浆/血清的过程中应避免样本发生溶血；标本2-8℃存放不超过48h。

②供试液制备：取血浆/血清0.1ml加入样品稀释瓶中，混匀后75℃放置10分钟，取出冷却至室温，即为1：10稀释的样品供试液。若不立即使用，应把样品稀释瓶封口移至2-8℃冰箱存放，24小时内使用。

注意：检测环境应保持清洁，避免样本污染。

图5.(1-3)-β-D-葡聚糖检测样本

4、检验结果

本科室所采用的试剂盒检测正常人血浆/血清的(1-3)-β-D-葡聚糖.5pg/ml。

①样品平行检查管的变异系数（CV%）需小于15%，否则表示均一性不好，测量值不可靠。

②测量值小于.5pg/ml，为正常值；测量值介于.5-.5pg/ml之间，为感染初期，应连续检测；测量值大于.5pg/ml，为念珠菌、曲霉菌或肺孢子菌深部感染。

5、影响因素

以下情况可出现假阳性：

①使用纤维素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其他含有葡聚糖的材料。

②静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品等。

③链球菌血症。

④注射过某些中药注射剂，如黄芪多糖注射液、双黄连注射液、生脉注射液等药物。

⑤使用多糖类抗癌药物及放化疗等造成粘膜损伤导致摄入的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液。

⑥标本存在污染。

6、临床意义

①早期诊断：侵袭性真菌感染增多且复杂，早期症状无特异性，往往被原发病掩盖，病程长、确诊晚、死亡率高，因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早期诊断。

②指导用药：深部抗真菌治疗在选择药物时需考虑致病真菌的种类、抗真菌药物的抗菌谱、药动学和药效学、不良反应及药物间相互作用，同时要结合不同地区真菌感染的流行病学资料、医院实际情况、患者病情和经济状况等因素，合理选择抗真菌药物。目前全身应用的抗真菌药有两性霉素B、去氧胆酸盐及其含脂制剂、吡咯类（氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑）、棘白菌素类（卡泊芬净、阿尼芬净、米卡芬净）和氟胞嘧啶等。

虽然(1-3)-β-D-葡聚糖只能提示有无真菌侵袭性感染，但是由于系统抗真菌药物种类较少，抗菌谱较广，且不因真菌种类而异，当检测到标本中(1-3)-β-D-葡聚糖含量升高时，可给予系统治疗，不必耗时等待鉴定出种属，以免耽误最佳治疗时机。

③评价效果：应用抗真菌药物后，定期检测血浆中葡聚糖浓度变化，评价选用药物的有效性。

④监护病程：动态观察并监护深部真菌感染易感人群的病发状态。

综上所述，(1-3)-β-D葡聚糖检测作为深部真菌感染的早期诊断方法有较高的临床应用价值，对真菌感染的诊断及疗效评估具有重要意义。但由于影响因素较多，可以导致假阳性和假阴性结果，因此在应用时需结合其他感染相关的检测指标，如C-反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、白细胞等，并结合临床症状进行综合分析，以免造成漏诊和误诊。

小贴士

①标本送检要求：采样过程要求严格无菌操作，避免热源污染。常规病人早上用药治疗前空腹采血取样，血透患者宜透析前采血。避免溶血、脂血或黄疸血。

②对阳性样品，应24小时内再次抽血复查，以确诊；对观察期病人，应每周取1-2次血检测以观察病情发展；对确诊病人，建议每周做2-3次检测，以观察用药后的效果。

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