呼吸道病原体IgM抗体检测的真真假假

医院（河南中医院）检验科刘玉春

起飞

近年来，由于环境污染等因素的影响，呼吸道感染患者呈逐年上升趋势，尤其是儿童和青少年。急性呼吸道感染可分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道常见病因为病毒，少数由细菌引起，下呼吸道感染则由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起。

由于引起呼吸道疾病的病原体种类繁多，其感染引起的症状又很相似，在临床上难以鉴别。非典型病原体是最常见的引起呼吸道感染的病原体，包括嗜肺军团菌、肺炎支原体、Q热病原体，腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒等。实验室检测能够通过多种检测手段将其区分清楚，目前，实验室检测方法主要有：病原体分离培养，免疫荧光法和聚合酶链反应（PCR）等。细菌和病毒的分离培养法操作复杂、培养时间长、技术难度大以及阳性率低等缺点限制了其临床应用，PCR技术很难达到多种病原体的系列检测。免疫荧光技术利用抗原抗体反应的高特异性和荧光的敏感性，能够快速而准确地检测多种病原体，然而在实验过程中，我们会遇到阴性质控区和以细胞为背景的病原体检测区均出现阳性荧光反应的情况。干扰了结果的判断，以下我们用具体病例来讨论免疫荧光技术在呼吸道病原学检测中的影响因素。

病例资料

曹**，女，29岁，以咽干，咽部异物感3周，加重伴咽痛、咳嗽2天为主诉就诊。

现病史：3周前无明显诱因出现咽干、咽部异物感，于院外诊断为咽颊炎，雾化及口服药物治疗欠佳，于诊所诊断为疱疹性咽颊炎，伴热，输液治疗，欠佳。2天前症状加重，伴咽痛，咳嗽，发热。

过敏史：无

（-05-07）C-反应蛋白定量：CRP：2.00mg/L,血常规（五分类）：WBC:10.70×　、EO：0.04×　

（-05-08）呼吸道病原体检测（血清）：阴性质控出现阳性反应。

实验室进一步检查结果

类风湿因子IgG:14.52、IgA:3.67、IgM:31.11;CCP：0.50；

自身免疫抗体（IIF）抗核抗体1：，核均质型+核颗粒型，SSA（+）,dsDNA(+)。

讨论

我们普遍的认为IgM是近期感染的一种标志物，一般情况在感染后一周左右出现在血清中，存在2-3个月，主要用于疾病的早期诊断。安图生物的九项呼吸道病原体IgM抗体试剂盒是一种能够同时检测多种呼吸道病毒和非典型病原体的方法。

如在上述病例中该患者阴性质控区出现阳性反应，同时，嗜肺军团菌、肺炎支原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1，2，3型均阳性的现象，更换试剂批号重新检测一次，所得结果一致，因此，该检测结果无法进行准确判断，需要从实验原理入手分析原因。

首先，其原理是间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应。用免疫荧光显微镜观察结果。此方法IgG吸附剂沉淀血清中IgG，所以阴性对照孔中应该没有荧光反应。

是什么原因造成了本次实验阴性对照孔中出现了荧光反应呢？此间接免疫荧光实验的反应基质是从第一孔到质控孔（1、3、4孔除外）都是包被“感染”了相应病原体的各种细胞，通过进一步检测了解到该患者类风湿因子和抗核抗体都是阳性。

抗核抗体（antinuclearantibody，ANA），是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称，能与绝大多数动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。它是针细胞中多种成分的一类自身抗体的总称。ANA主要是IgG，也见于IgM、IgA，甚至IgD及IgE。所以如果血清中存在抗核抗体，那么该抗体就容易和细胞中的多种成分发生反应，再加之该反应基质就是细胞，所以就造成了有细胞成分就有可能出现有荧光反应的现象，这就不难解释阴性对照孔中出现阳性反应的现象了。

但是出现了上述患者的情况，我们检验人员应该怎么办呢？实验中我们用吸附剂将免疫球蛋白IgG和部分类风湿因子的干扰去除了，正在尝试是否可以用吸附剂或者稀释液将抗核抗体的干扰去除，但是目前结果并不理想。另外就是用其他实验方法，比如用酶免法和分子学方法检测。所以检验人员一定要排除实验的干扰因素，用合适的方法得出准确的结果，从而更有效的指导临床。

编辑整理：李辉

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